PENENTUAN STRUKTUR ALKALOID

IDENTIFIKASI SENYAWA NIKOTIN PADA DAUN TEMBAKAU

Hasil Ekstraksi dari Daun Tembakau

Pada penelitian ini sampel yang digunakan adalah daun tembakau kering warna coklat  tua  yang  telah  dirajang  tipis.  Daun  tembakau  kering  tersebut  diekstraksi dengan  menggunakan  pelarut  metanol.  Adapun  perlakuannya  dapat  dilihat  pada tabel 4.

Tabel 4. Hasil ekstraksi senyawa dari daun tembakau kering.

Sampel	Perlakuan	Pengamatan	Hasil
Daun Tembakau kering	25 gram daun tembakau kering diekstraksi dengan menggunakan metanol 300 mL selama 7 jam	Diperoleh larutan keruh sebanyak 1100 mL dengan warna coklat tua dan terdapat endapan melayang berwarna putih kecoklatan.	Hasil diperoleh dari lapisan atas yaitu lapisan metanol berbentuk cair berwarna coklat tua sebanyak 70 mL
	Ekstrak dievaporasi selama 2 jam menggunakan evaporator	Larutan menjadi pekat dengan volume 125 mL
	Ekstrak diasamkan dengan H2SO4  2 M sebanyak 25 mL dan diaduk dengan magnetik stirer	Larutan menjadi agak jernih dan dites dengan lakmus biru, kertas menjadi merah
	Larutan yang terjadi diekstrak dengan menggunakan kloroform 25 mL sebanyak 3 kali	Lapisan atas : Lapisan metanol yang berwarna coklat tua Lapisan bawah : Lapisan organik yang berwarna coklat jernih
	Ektrak dibasakan dengan NH4OH 2 M bertetes- tetes	Larutan menjadi basa dengan warna kertas lakmus biru
	Larutan diektrak lagi dengan kloroform 25 mL sebanyak 3 kali	Lapisan atas : lapisan metanol yang berwarna lebih tua Lapisan bawah : lapisan organik yang berwarna lebih jernih

Hasil Identifikasi Senyawa           dalam Ekstrak Daun      Tembakau  dengan

Menggunakan Kromatografi Kolom

Nikotin yang diisolasi dari ekstrak daun tembakau dimurnikan dengan kromatografi kolom. Pada kromatografi kolom ini, digunakan silika gel  yang bebas air sebagai fase diamnya dan n heksana, kloroform dan metanol sebagai fase gerak (eluen). Hasil dari kromatografi kolom dapat dilihat di tabel 5.

Tabel 5. Hasil kromatografi kolom ekstrak daun tembakau dengan berbagai eluen

No botol	Eluen	Wujud	Warna	Bau	Uji Dragendrof
1-5	Heksana	Cair	Jernih	Heksana	(-)
6-10	Heksana	Cair	Jernih	Heksana	(-)
11-15	Kloroform	Cair	Kekuningan	Menyengat	(-)
16-20	Kloroform	Cair	Kekuningan	Menyengat	(-)
21-25	Kloroform:Metanol = 3:17	Cair	Jernih	Menyengat	(-)
26-30	Kloroform:Metanol = 3:17	Cair	Jernih	Menyengat	(-)
31-35	Kloroform:Metanol = 5:5	Cair	Kekuningan	Menyengat	(-)
36-40	Kloroform:Metanol = 5:5	Cair	Kekuningan	Menyengat	(-)
41-45	Kloroform:Metanol = 17:3	Cair	Coklat muda	Metanol	(-)
46-50	Kloroform:Metanol = 17:3	Cair	Coklat muda	Metanol	(-)
51-55	Metanol	Cair	Coklat tua	Tembakau	(+)
56-60	Metanol	Cair	Coklat tua	Tembakau	(+)

Dari hasil kromatografi kolom dapat dilihat bahwa nomor botol 51–60 positip  terhadap reagen Dragendroff. Selanjutnya dilakukan analisis lebih lanjut untuk identifikasi.

Hasil        Identifikasi   Senyawa   dalam   Ekstrak    Daun   Tembakau    dengan

Menggunakan KLT

Pada tahap ini hasil dari kromatografi kolom (larutan yang lebih pekat) yang sudah  diperoleh  kemudian  diidentifikasi  dengan  kromatografi  lapis  tipis  dengan menggunakan larutan pengembang metanol. Adapun bercak dari kromatografi lapis

tipis dilihat  dengan  lampu  UV  pada  panjang  gelombang  254  nm.  Hasil  uji  KLT

disajikan pada tabel 6.

Tabel 6. Hasil kromatografi lapis tipis dengan larutan pengembang metanol

Faksi	Jarak pengembang(cm)	Jarak Noda (cm)	Rf
1	12	0	0
2	12	9	0,75
3	12	9	0,75
4	12	8,9	0.74
5	12	9,6	0,80
6	12	8,7	0,725

Dari hasil analisis kromatografi lapis tipis didapat pemisahan hanya satu puncak tiap sampel maka dapat diartikan bahwa telah terpisah sempurna menghasilkan satu senyawa. Adapun rata–rata Rf 0.75. Analisis lanjutkan dengan IR, UV, dan GC-MS

D.  Hasil  Spektrofotometer  Inframerah  (IR)  dalam  Ekstrak  Daun  Tembakau

Fraksi Metanol

Spektrofotometer infra merah digunakan untuk menganalisis gugus fungsi dari senyawa  kimia  yang  terdapat  pada  daun  tembakau  dengan  pelarut  metanol.  Uji dengan  spektrometer  infra  merah  menghasilkan  spektra  IR  seperti  tampak  pada gambar 8.

Gambar 8. Spektrum infra merah hasil kromatografi kolom fraksi keenam

Hasil identifikasi ekstrak tembakau fraksi metanol dengan menggunakan spektrofotometer  IR  menunjukkan  adanya  serapan  yang  khas  di  daerah  bilangan gelombang 2950,9 cm-1  dan 2838,0 cm-1  menunjukkan adanya ikatan C – H , pada bilangan gelombang 1651,0 cm-1  menunjukkan adanya gugus aromatis, pada bilangan gelombang 1458,1 cm-1  menunjukkan adanya gugus –CH3  , pada bilangan gelombang

1396,4 cm-1  menunjukkan adanya gugus amina tersier aromatis, dan pada bilangan gelombang 1018,3 cm-1  menunjukkan adanya amina tersier alifatis. Adanya serapan pada  bilangan   gelombang  3398,3  menunjukkan  adanya  gugus  –OH.  Hal  ini dikarenakan penggunaan pelarut metanol pada saat kromatografi kolom.

Hasil  Uji  dengan  Spektrofotometer  UV  Ekstrak  Daun  Tembakau  Fraksi

Metanol

Spektrofotometri  UV  digunakan  untuk  senyawa  organik  yang  berhubungan dengan  transisi elektronik pada tingkat–tingkat energi elektron tertentu. Biasanya

senyawa yang terukur mempunyai ikatan rangkap terkonjugasi. Nikotin mempunyai ikatan rangkap terkonjugasi pada cincin piridinnya. Hasil spektrum UV dari ekstrak daun tembakau dapat dilihat pada gambar 9.

Gambar 9. Spektrum UV-Vis dari ekstrak daun tembakau

Dari gambar  spektrum  di  atas  dapat  dilihat  bahwa  ekstrak  daun  tembakau mempunyai  panjang  gelombang  206  nm  dan  262  nm.  Dari  literatur  diperoleh panjang gelombang  maksimum cincin piridin adalah 251 nm (π→π*) dan 270 nm (n→π*) dalam  etanol.  Perbedaan  serapan  maksimum  mungkin  disebabkan  oleh perbedaan pelarut yang digunakan.

Hasil GC-MS Ekstrak Daun Tembakau Fraksi Metanol

Kromatogram GC-MS hasil ekstrak dengan pelarut metanol, dapat dilihat pada gambar 10.

Gambar 10. Kromatogram GC-MS dari ekstrak daun tembakau

Berdasarkan kromatogram hasil GC-MS menunjukkan bahwa di dalam ekstrak daun tembakau mengandung senyawa nikotin yang muncul pada (tR) 9,245 s dengan indeks kemiripan 63  % dan kadar relatif terhadap sampel 1,88 %. Menurut hasil tersebut senyawa ini mempunyai  indeks kemiripan dengan senyawa 3-(1-metil-2- pirolidinil)                        piridin. Senyawa ini mempunyai fragmentasi puncak  m/e 162,133,119,98,98,84,78,65,42. Setelah  dilakukan  studi  pustaka,  ternyata  senyawa  3-(1-metil-2-pirolidinil) . piridin merupakan suatu senyawa alkaloid yang bernama nikotin.

PERMASALAHAN

Dari gambar  spektrum UV  di  atas  dapat  dilihat  bahwa  ekstrak  daun  tembakau mempunyai  panjang  gelombang  206  nm  dan  262  nm.  Dari  literatur  diperoleh panjang gelombang  maksimum cincin piridin adalah 251 nm (π→π*) dan 270 nm (n→π*) dalam  etanol.  Perbedaan  serapan  maksimum  mungkin  disebabkan  oleh perbedaan pelarut yang digunakan.

Pertanyaan

Mengapa pada etanol yang kurang polar dari methanol menghasilkan panjang gelombang yang lebih besar ?